La Route66 ha dato il nome a molte aziende ed è stata immortalata anche nella letteratura, musica e televisione statunitense. Anche molte compagnie sono associate con la Highway 66 per il fatto di essere sulla strada o poco distante da essa, ad esempio: la benzina Phillips 66.

Alla fine degli anni '20 due ingegneri chimici scelsero il tratto che attraversa l'Oklahoma per testare le qualità di una nuova benzina prodotta da una compagnia di Tulsa approfittando del fatto che si presenta piatto e senza curve.

Il test andò particolarmente bene, tanto che il passeggero esclamò che l'auto andava a like sixty (A sessanta). Il conducente controllò il tachimetro e rispose che stavano andando like 66 (a 66). La combinazione del numero della strada e della velocità dell'auto dette il nome alla benzina che si chiama così anche oggi. Nel 1940, lo scrittore californiano John Steinbeck pubblicò Grapes of Wrath (Furore), il suo racconto narra il percorso verso ovest dei contadini dell'Oklahoma durante il Dust Bowl verso la valle di San Joaquin in California. Il libro descrive i molti problemi avuti da queste persone, incluso pregiudizi e povertà e come viaggiarono per il sogno di una vita migliore. Steinbeck dedica un capitolo a descrivere il percorso verso ovest, che attraversa Oklahoma City e prosegue lungo la Route66. Lo scrittore si riferisce alla 66 come la Mother Road (Strada madre), un soprannome che è ancora usato. Il libro vinse il Premio Pulitzer e rese la strada ancora più famosa.

Nel 1946, il compositore jazz e pianista Bobby Troup scrisse la sua famosa Get Your Kicks On. Route66, dopo aver percorso di persona la highway per andare in California. Egli mostrò la canzone a Nat King Cole che la fece diventare uno dei più grandi singoli della sua carriera. Il titolo gli fu suggerito dalla prima moglie di Troup, Cynthia, che lo accompagnò durante il viaggio.

La canzone più tardi divenne un pezzo del repertorio di Chuck Berry e fu incisa da molti altri artisti, inclusi i Rolling Stones e i Depeche Mode.

La strada dette il suo nome anche ad un popolare spettacolo televisivo Route66, trasmesso da 1960 al 1964 dalla CBS. Lo spettacolo vedeva Martin Milner e George Maharis nei ruoli di "Tod" e "Buzz", due giovani americani a bordo della loro Corvette in cerca di avventure sulle strade americane. Da allora la Corvette è l'auto che maggiormente è stata associata alla Route66.
Un altro prodotto della General Motors è associato alla Route66: il Cadillac Ranch, posto vicino ad Amarillo (Texas) è noto per avere 10 Cadillac d'epoca infilate in senso diagonale nel terreno con il muso sotto terra.

La squadra di pallacanestro della NBA Development League di Tulsa, i Tulsa 66ers, deve il suo nome alla strada. Questa ha dato il nome anche ad una squadra della Minor League Baseball dal nome Inland Empire 66ers.

Al giorno d'oggi la linea di jeans di K-Mart porta il nome della vecchia Highway con il nome Route66.

Nel film della Disney In viaggio con Pippo (A Goofy movie), Pippo e suo figlio Max vanno in vacanza usando la Highway 66.

Nella serie televisiva Stargate SG-1, nell'episodio "1969", il gruppo di SG-1 guida un furgoncino Volkswagen lungo buona parte del percorso della strada, con i cartelli Route66 al loro posto.

Anche una casa produttrice di software per la navigazione ha preso il nome ed il simbolo dalla Highway.

Nel film d'animazione Cars - Motori ruggenti la cittadina di "Radiator Springs" sorge proprio sulla Route66; qui si svolge la storia di "Saetta McQueen", una macchina da corsa che ritrova il valore dell'amicizia e il piacere di una vita più tranquilla e "slow" rispetto alla frenesia a cui è abituato correndo sui circuiti della "Piston Cup" e sui noiosi rettilinei delle Highway...

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